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對細胞進行鋪板要進行哪些操作

更新時間:2023-03-07      點擊次數:900
  細胞鋪板是細胞實驗中最常見又必須掌握的一門技術,看似簡單,然而卻經常遇到如細胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現象,結果就是只能整板扔掉,重新鋪板,既耽擱時間又浪費了細胞及培養板等資源。所以在進行細胞鋪板的時候應該注意哪些事情。
  細胞居中和細胞邊緣化
  從經濟和高效的角度來說,需要根據實驗目的選擇不同規格的培養板。如在進行藥物對待測細胞半抑制率(IC50)測試時,通常使用96孔板,一方面可以設置濃度梯度;另外還可一次性測多個藥物,減少實驗誤差。
  收集細胞要混勻
  消化后的細胞一定要充分混勻,要把聚在一起的細胞團充分地吹打開,最好是單個的狀態,但同時又不能損傷細胞,可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究,一般用1000 rpm/min即可。離心力太大細胞容易抱團!然后懸浮離心后的細胞團時,先不要把所有液體都加進去!一般先加2mL液體,然后用1mL移液器輕輕將細胞吹起,細胞要像云霧一樣散開,這樣易于形成單細胞。象下圖所示的這種移液器就非常好用。
  接種細胞須小心
  鋪6孔板,12孔板或24孔板,先在每個孔里面加1mL的培養基,晃動使之鋪勻整個孔底,然后加入1 mL的細胞懸液。從孔的左邊靠近底部慢慢加入,這樣細胞懸液會平鋪在整個孔底,細胞分散較均勻,注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。
  輕輕敲打勿抱團
  細胞懸液加完后,將細胞培養板抬高,對著燈光,從底部往上看,看細胞有沒有抱團。如果有抱團的話,用手指從底部輕輕敲打,使之分散。也可以用平板振蕩器稍稍振蕩一下,效果不錯。參數要設置成振幅小而頻率高。
  十字交叉要水平
  觀察和敲打后放入培養箱,然后畫“十字”,就是把細胞培養板貼著培養箱擱板,前后方向來回晃動10次,再左右方向晃動10次,正好是一個“十” 字形。然后就讓它靜靜地呆在培養箱擱板上,沒事不要去動它。這里要注意的是,托架應該裝在四根立柱相同高度的孔上,培養箱的擱板要水平校正,盡量地做到水平。擱板會向一個方向傾斜,對于貼壁時間長的細胞,就算當時混勻了,放進培養箱后也搖勻了,但是重力作用下細胞也會向一側聚集。 培養箱里面或者外面盡量不要放可以產生振動的儀器,比如蠕動泵、離心機、渦旋器一類的儀器。這些儀器產生的振動對細胞貼壁有影響,也可能會導致細胞貼壁不均勻。
 
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