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人β淀粉樣蛋白1-42(aβ1-42)酶聯免疫檢測試劑盒介紹

更新時間:2023-07-17      點擊次數:338

   用于人血清、血漿及相關液體樣本中褪黑素 (Aβ1-42)測定。

工作原理

本試劑盒采用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中人褪黑素 (Aβ1-42)水平。向預先包被了人褪黑素 (Aβ1-42)單克隆抗體的酶標孔中加入人褪黑素 (Aβ1-42),溫育;溫育后,加入生物素標記的抗褪黑素 (Aβ1-42)抗體。再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然后加入底物A、B,產生藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人褪黑素 (Aβ1-42)的濃度呈正相關。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標準品6400 pg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

鏈霉親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

生物素標記的抗褪黑素 (Aβ1-42)抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

需要而未提供的試劑和器材

1. 37恒溫箱。

2. 標準規格酶標儀。

3. 精密移液器及一次性吸頭

4. 蒸餾水,

5. 一次性試管

6. 吸水紙

注意事項

1. 2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差

3. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

4. 免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。

5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

6. 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。

自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中

標本要求

1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融。

操作程序

1. 標準品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。)

3200 pg/ml

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

1600 pg/ml

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

800pg/ml

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

400pg/ml

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

200pg/ml

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液



























2. 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

3. 加樣:1)空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗褪黑素 (Aβ1-42)抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標準品孔:加入標準品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)代測樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗褪黑素 (Aβ1-42)抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘。

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

7. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

8. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。

9. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。

操作程序總結:

1.準備試劑,樣品和標準品

2.加入準備好的樣品和標準品,生物素標記的二抗和酶標試劑,37℃反應60分鐘

3.洗板5次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘

4.加入終止液

5.10分鐘內讀OD值

6.計算

檢測范圍:100 pg/ml→3200 pg/ml。

保存:2-8。

有效期:6個月(2-8℃)。

 

 

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