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抗酸桿菌染色方案

更新時間:2023-12-27      點擊次數:46

分枝桿菌細胞壁含有由分枝菌酸組成的蠟狀物質。這些是鏈長最多 90 個碳原子的 ?-羥基羧酸。耐酸牢度的特性與任何特定物種中發現的分枝菌酸的碳鏈長度有關(Lyon H 1991)。

 

堿性品紅與細菌中帶負電的基團結合。分枝菌酸(和其他細胞壁脂質)對染料進入和洗脫(用溶劑洗掉)構成障礙,通過在堿性品紅濃水溶液中添加親脂劑和部分加熱可以部分克服這一障礙。

 

技術要點: 包括一個控件

 

方法

  1. 將工作溶液放入科普林罐中,并在 58 -60 ℃水浴中預熱10 分鐘。

  2. 將切片脫蠟,放入水中。

  3. 在水浴中預熱的工作溶液中染色 15 分鐘。

  4. 將裝有載玻片的 COPLIN JAR放入流動的冷自來水中 2 分鐘。

  5. 從科普林罐中取出載玻片并用流水清洗 1 分鐘。

  6. 在酸性酒精中進行分化,直到載玻片上不再有顏色流出。

  7. 用水短暫清洗以除去酸性酒精

  8. 用亞甲藍復染 15 至 30 秒。

  9. 水洗、脫水、澄清并封固在 DPX 中。

結果

  • 抗酸桿菌................................................紅色

  • 細胞核................................................藍色

  • 其他組織成分................................藍色

試劑配方

 

1、染色液:

 

庫存溶液 A(穩定 6 個月)

                        LOC 高泡沫(安利)....... 0.6 毫升

                        蒸餾水............................ 100 毫升

            庫存溶液B       

                        堿性品紅...................................... 1克

                        無水乙醇...................... 10 毫升

            這兩種溶液可以作為儲備溶液保存并在使用前混合。

 

2. 工作液(穩定1個月)

                    將 50ml A 與 5ml B 混合。

 

3.酸性醇——3%鹽酸溶于95%乙醇

                        無水乙醇......................... 95ml

                        蒸餾水......................2毫升

                        濃鹽酸...3毫升

            配制酒精溶液,然后加入濃酸。當

            處理濃酸。

 

4. 1%乙酸中的0.25%亞甲藍

亞甲基藍........................0.25克

蒸餾水................................99毫升

乙酸...................................... 1 毫升


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